Диагностика методом ОТ-ПЦР на энтеровирусы – одно исследование на всю группу
Выявление вирусов рода Enterovirus (Echovirus, Сoxsackievirus, Poliovirus), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.
Enterovirus – это группа РНК-содержащих вирусов, характеризующихся нуклеокапсидом в форме икосаэдра и отсутствием оболочки. Они относятся к семейству Picornaviridae, в которое также входят возбудитель вирусного гепатита А и риновирус.
Род Enterovirus объединяет несколько десятков различных вирусов, являющихся возбудителями целого спектра заболеваний человека: полиомиелита (Poliovirus), миокардита и перикардита (Сoxsackievirus В), вирусной пузырчатки полости рта и конечностей, герпетической ангины, асептического менингита и энцефалита (Сoxsackievirus A, Echovirus), а также более редких болезней. Для всех вирусов рода Enterovirus характерен схожий патогенез: попадание возбудителя в желудочно-кишечный тракт (фекально-оральный путь передачи), репликация в эпителиальных клетках слизистой оболочки ЖКТ и гематогенное распространение с поражением различных органов и тканей. Учитывая эти особенности заражения, основными биологическими средами для выявления Enterovirus являются отделяемое носоглотки, кал и ликвор. Как правило, острая инфекция Enterovirus протекает бессимптомно или в доброкачественной форме, а клиническая картина заболевания развивается лишь спустя некоторое время после первичного заражения. Эту особенность следует учитывать при выборе вида биоматериала, направляемого на анализ.
Для выявления возбудителя при подозрении на Enterovirus-ассоциированную инфекцию применяют серологические тесты, выделение вируса в культуре клеток и молекулярную диагностику.
ПЦР основана на непосредственном выявлении РНК вируса и может быть применена для выявления Enterovirus на раннем этапе болезни, что отличает ее от серологических (непрямых) методов, требующих около 2-4 недель для оценки динамики уровня выявляемых специфических антител. Однако по этой же причине ПЦР не позволяет различить острую и хроническую энтеровирусную инфекцию.
Благодаря тому, что в ПЦР выявляется общий для всех Enterovirus фрагмент РНК, она позволяет определить наличие любого представителя этого рода. Современные серологические методы разработаны только для 11 из более чем 70 вирусов рода Enterovirus.
Диагностика заболеваний, вызванных вирусами рода Enterovirus, представляет определенные трудности и требует проведения дополнительных лабораторных, а также инструментальных исследований.
- Кал собирается после естественной дефекации в чистую ёмкость.
- Запрещается собирать кал из памперсов, после клизмы, в период менструации или в течение 3 дней до или после нее, при наличии кровоточащих геморроидальных узлов, кровоточивости при длительных запорах, с примесями мочи или выделений из половых органов, через 2 дня после проведения рентгенологического исследования желудка и кишечника с использованием контрастных препаратов.
- За 2 дня до исследования кала нужно отменить (по согласованию с врачом) следующие препараты: слабительные, активированный уголь и другие энтеросорбенты, препараты висмута, железа и препараты, вводимые в ректальных свечах, приготовленных на жировой основе.
- Для исследований предпочтительно использовать утреннюю порцию фекалий.
- Нельзя отбирать пробу из унитаза.
- Испражнения собираются из разных мест специальной лопаточкой вмонтированной в крышку контейнер, в объёме примерно 1/3 контейнера.
- При сдаче более одного исследования кала одновременно - необходимое количество контейнеров с биоматериалом желательно уточнить в справочной по телефону, или исходить из расчета один отдельный контейнер для каждого анализа.
Подозрение на энтеровирусную инфекцию при тяжелом течении заболевания и необходимости комплексной дифференциальной диагностики;
Эпидемиологические исследования при вспышках энтеровирусной инфекции.
Причины положительного результата:
1. Enterovirus-ассоциированная инфекция;
2. носительство Enterovirus.
Причины отрицательного результата:
отсутствие Enterovirus в исследуемом биоматериале.